Campylobacter in broiler slaughter samples assessed by direct count on mCCDA and Campy-Cefex agar

ABSTRACT Campylobacter spp. cause foodborne illnesses in humans primarily through the consumption of contaminated chicken. The aim of this study was to evaluate the United States Department of Agriculture's (USDA) recommended methodology, protocol MLG 41.02, for the isolation, identification and direct plate counting of Campylobacter jejuni and C. coli samples from the broiler slaughtering process. A plating method using both mCCDA and Campy-Cefex agars is recommended to recover Campylobacter cells. It is also possible to use this method in different matrices (cloacal swabs and water samples). Cloacal swabs, samples from pre-chiller and post-chiller carcasses and samples of pre-chiller, chiller and direct supply water were collected each week for four weeks from the same flock at a slaughterhouse located in an abattoir in southern Brazil. Samples were analyzed to directly count Campylobacter spp., and the results showed a high frequency of Campylobacter spp. on Campy-Cefex agar. For the isolated species, 72% were identified as Campylobacter jejuni and 38% as Campylobacter coli. It was possible to count Campylobacter jejuni and Campylobacter coli from different samples, including the water supply samples, using the two-agar method. These results suggest that slaughterhouses can use direct counting methods with both agars and different matrices as a monitoring tool to assess the presence of Campylobacter bacteria in their products.

Detecção dos genes codificantes da toxina CDT, e pesquisa de fatores que influenciam na produção de hemolisinas em amostras de Campylobacter jejuni de origem avícola / Detection of the genes encoding the toxin CDT, and research factors which influence the production of hemolysin in Campylobacter jejuni from poultry products

Membros termofílicos do gênero Campylobacter são reconhecidos como importantes enteropatógenos para o ser humano e animais. A grande diversidade ecológica destes micro-organismos em diferentes habitats tais como água, animais e alimentos predispõem ao aparecimento de novos fatores de virulência. Este trabalho teve por objetivo detectar os genes codificantes da Toxina Distensiva Citoletal (CDT) por meio da técnica de PCR, pesquisar a atividade de hemolisinas e a influência de soluções quelantes e de íons nesta atividade. Foram utilizadas 45 amostras de Campylobacter jejuni de origem avícola para pesquisa de atividade hemolítica, cultivadas em Caldo Triptona de Soja (TSB). Após o crescimento bacteriano, as amostras foram semeadas em Ágar tríptico de soja (TSA) contendo 5% de sangue de ovino. Para verificar a influência de agentes quelantes e solução de íons na atividade hemolítica, as amostras de C. jejuni foram cultivadas em TSB contendo separadamente os quelantes EDTA, ácido acético, soluções de íons CaCl2, MgCl2 e FeCl3, em atmosfera de microaerofilia. Quanto à atividade de hemolisina de C. jejuni em placas de TSA - sangue ovino foi possível observar que houve hemólise em 40% das amostras analisadas apenas com caldo TSB. Somente o ácido acético apresentou ação quelante sobre a atividade de hemolisinas em amostras de C. jejuni semeadas em placas de TSA - sangue ovino. Para detecção dos genes cdtA, cdtB e cdtC através da técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) foram utilizadas 119 amostras de C. jejuni de origem avícola. Foi possível observar que 37,8% possuíam o perfil de genes cdtABC. Os resultados demonstraram em amostras avícolas a presença de cepas de C. jejuni com potencial virulento, devido à presença dos genes da toxina CDT e potencial hemolítico, que apresentou ação reduzida in vitro com ácido acético...

Thermophilic members of the Campylobacter genus are recognized as important enteropathogenics for humans and animals. The great variety of ecological habitats, such as water, food and milk, may promote new virulence factors. To detect the encoding genes distending cytolethal toxin (CDT) by PCR and study the hemolytic activity with influence of chelation solutions and ions, 45 Campylobacter jejuni samples from poultry production origin were used to perform the hemolytic research. To check the influence of chelation agents and solution of ions in the hemolytic activity, samples of C. jejuni strains were grown in tryptone soy broth TSB containing chelation agents separately EDTA, acetic acid, CaCl2, MgCl2 and FeCl3 ions solutions in microaerophilic atmosphere and then streaked on 5% sheep blood tryptic soy agar (TSA). To perform the detection of cdtA, cdtB and cdtC genes the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR) was used in 119 samples of C. jejuni from poultry production origin. We found 40% of samples showing hemolysis after growing with TSB. Only the acetic acid showed reduction in hemolysis. The prevalent gene profile was cdtABC in 37.8 % of the samples. It was observed that the results showed the presence of C. jejuni strains with virulent potential, due to presence of the CDT toxin genes and the hemolytic activity, which showed in vitro reduced when acetic acid was added...

Detection of virulence-associated genes in Salmonella Enteritidis isolates from chicken in South of Brazil / Detecção de genes associados à virulência em cepas de Salmonella Enteritidis isoladas de frangos na região sul do Brasil

Salmonella spp. are considered the main agents of foodborne disease and Salmonella Enteritidis is one of the most frequently isolated serovars worldwide. The virulence of Salmonella spp. and their interaction with the host are complex processes involving virulence factors to overcome host defenses. The purpose of this study was to detect virulence genes in S. Enteritidis isolates from poultry in the South of Brazil. PCR-based assays were developed in order to detect nine genes (lpfA, agfA, sefA, invA, hilA, avrA, sopE, sivH and spvC) associated with the virulence in eighty-four isolates of S. Enteritidis isolated from poultry. The invA, hilA, sivH, sefA and avrA genes were present in 100% of the isolates; lpfA and sopE were present in 99%; agfA was present in 96%; and the spvC gene was present in 92%. It was possible to characterize the isolates with four different genetic profiles (P1, P2, P3 and P4), as it follows: P1, positive for all genes; P2, negative only for spvC; P3, negative for agfA; and P4, negative for lpfA, spvC and sopE. The most prevalent profile was P1, which was present in 88% of the isolates. Although all isolates belong to the same serovar, it was possible to observe variations in the presence of these virulence-associated genes between different isolates. The characterization of the mechanisms of virulence circulating in the population of Salmonella Enteritidis is important for a better understanding of its biology and pathogenicity. The frequency of these genes and the establishment of genetic profiles can be used to determine patterns of virulence. These patterns, associated with in vivo studies, may help develop tools to predict the ability of virulence of different strains.

Salmonella spp. estão entre os principais agentes causadores de doenças transmitidas por alimentos, e o sorovar Salmonella Enteritidis é o mais frequentemente isolado no mundo. A virulência de Salmonella spp. e a sua interação com o hospedeiro são processos complexos que envolvem fatores de virulência para sobreviver às defesas do hospedeiro. O objetivo deste estudo foi detectar genes de virulência em cepas de S. Enteritidis isoladas a partir de fontes avícolas no sul do Brasil. Ensaios de PCR foram desenvolvidos para a detecção de nove genes (lpfA, agfA, sefA, invA, hilA, avrA, sopE, sivH e spvC) associados à virulência em oitenta e quatro amostras de S. Enteritidis. Os genes invA, hilA, sivH, sefA e avrA estavam presentes em 100% dos isolados; lpfA e sopE estavam presentes em 99%; agfA em 96%; e o gene spvC estava presente em 92%. Foi possível caracterizar os isolados em quatro perfis genéticos distintos (P1, P2, P3 e P4), sendo P1 positivo para todos os genes; P2 negativo apenas para spvC; P3 negativo para agfA e P4 negativo para lpfA, spvC e sopE. O perfil de maior frequência foi P1, presente em 88% dos isolados. Apesar de todos os isolados pertencerem ao mesmo sorovar, foi possível observar variações na presença de genes associados à virulência entre os mesmos. A caracterização dos mecanismos de virulência circulantes na população de Salmonella Enteritidis é importante para um maior entendimento da sua biologia e patogenicidade. A frequência destes genes e o estabelecimento de perfis genéticos podem ser utilizados para determinar os padrões de virulência dos isolados. Estes padrões, associados a estudos in vivo, podem auxiliar na elaboração de ferramentas que permitam predizer a capacidade de virulência das diferentes cepas.

Avaliação in vitro de clorexidina, amônia quaternária e ácido peracético frente a amostras de Salmonella Heidelberg isoladas de abatedouro avícola em 2005 e 2009 / In vitro evaluation of chlorhexidine, quaternary ammonium and peracetic acid against Salmonella Heidelberg isolated from poultry slaughterhouse in 2005 and 2009

Objetivou-se avaliar a ação de três princípios ativos rotineiramente utilizados na higienização de abatedouros avícolas frente a amostras de Salmonella Heidelberg isoladas em diferentes pontos da tecnologia de abate de um mesmo frigorífico. Foram testadas 20 amostras de S. Heidelberg (14 isoladas em 2005 e seis em 2009) frente a clorexidina (0,5%), amônia quaternária (0,5%) e ácido peracético (1%) nos tempos de contato de 5, 10, 15 e 20 minutos. Todas as amostras foram sensíveis ao ácido peracético 1% em todos os tempos testados. Observou-se que 100% das amostras isoladas em 2005 foram sensíveis a amônia quaternária enquanto que as isoladas em 2009 apresentaram 33% de resistência com 5 minutos de contato e 16,6% com 10 minutos de contato. Com relação à clorexidina, 25% dos isolados em 2005 mostraram-se resistentes após 5 minutos de contato enquanto que 33% das amostras isoladas em 2009 foram resistentes neste tempo e 17% no tempo de 10 minutos de contato. Pode-se concluir que o ácido peracético teve ação in vitro sobre as amostras isoladas em 2005 e 2009, enquanto que a clorexidina e a amônia quaternária tiveram sua ação reduzida frente às amostras de 2009, indicando a progressão da resistência bacteriana frente a estes sanitizantes e a necessidade de testes periódicos e rotação de princípios ativos nos programas de higienização dos frigoríficos.

The objective of this investigation was to evaluate the in vitro sensibility of Salmonella Heidelberg to three commercially available disinfectants used for sanitization in poultry slaughterhouses. A total of 20 S. Heidelberg were tested (14 isolated in 2005 and six in 2009), and as active ingredients were used chlorhexidine (0.5%), quaternary ammonium (0.5 %) and peracetic acid (1%) at contact intervals of 5, 10, 15 e 20 minutes. All isolates were found to be sensitive to peracetic acid at four specific contact intervals. One hundred percent of S. Heidelberg isolated in 2005 was found to be sensitive to quaternary ammonium, while 33% of 2009 isolates were resistant at a 5-minute contact interval and 16.6% at 10-minutes. With respect to chlorhexidine, 25% of the 2005 isolates were resistant at a 5-minute contact interval, 33% of the 2009 isolates were resistant with the same time, and 17% at a 10-minute contact interval. It can be concluded that the highest disinfectant activity in vitro was found to be with peracetic acid for S. Heidelberg isolates in 2005 and 2009, whereas chlorhexidine and quaternary ammonium had a reduced action against 2009 isolates, indicating the progression of bacterial resistance against these sanitizers and the need for periodic evaluation and rotation of active principles for sanitization.

Behavior of Salmonella heidelberg and Salmonella enteritidis strains following broiler chick inoculation: evaluation of cecal morphometry, liver and cecum bacterial counts and fecal excretion patterns

Over the years, Salmonella Heidelberg (SH) has gained prominence in North America poultry production and in the poultry production of other countries. Salmonella Heidelberg has been isolated and reported from poultry and poultry products in Brazil since 1962, whereas Salmonella Enteritidis (SE) has only emerged as a serious problem in poultry and public health since 1993. These strains of Salmonella can cause intestinal problems in newly hatched chicks, and infection may persist until adulthood. Upon slaughter of chickens, Salmonella can contaminate carcasses, a condition that poses a threat to human health. The aim of this study was to compare the fecal excretion of Salmonella Enteritidis and Salmonella Heidelberg in newly hatched chicks (orally inoculated with 10(5)ufc/mL each) until 20 days of age. In addition, the ratio of cecal villus height:crypt depth (morphometry) and liver and cecum cell counts was analyzed in chicks ranging from 0 to 3 days of age and infected with these two Salmonella strains. One hundred seventeen chicks were separated into one of three experimental groups: a control group, an SE-infected group and an SH-infected group. Eight chicks per group were euthanized at 6, 12 and 72 hours post-inoculation (pi) to allow for Salmonella isolation from the liver and cecum and for the collection of the cecum for villi and crypt analysis. Other birds were allowed to mature to 20 days of age and cloacal swabs were taken at 2, 6, 13 and 20 days pi to compare the fecal excretion of inoculated strains. The Salmonella Enteritidis group had a higher number of cells excreted during the trial. Both strains were isolated from the liver and cecum by 6h pi. At 12h pi the Salmonella Heidelberg group had high cell counts in the cecum. No difference was found in liver cell counts. Both strains showed lower villus height:crypt depth ratio than the control group post-infection.

Número mais provável de Salmonella isoladas de carcaças de frango resfriadas / Most probable number of Salmonella isolated from refrigerated broiler carcasses

A Salmonella permanece um importante problema na avicultura e, considerando os patógenos transmitidos por alimentos, aparece como um dos agentes principais em surtos de toxinfecções alimentares. Para auxiliar na avaliação de riscos em adquirir infecção alimentar via carne de frangos que sofreram cocção inadequada, ou através de contaminação cruzada a partir desses animais, torna-se importante determinar a extensão de contaminação por patógenos em carne crua. No presente trabalho, foram analisadas 180 carcaças de frangos resfriadas, adquiridas em varejos, para pesquisa de Salmonella com determinação do número de células da bactéria. Foi utilizado o método do número mais provável (NMP) nos ágares para isolamento verde brilhante com novobiocina (BGN) e xilose-lisina tergitol 4 (XLT4). Os resultados mostraram 12,2 por cento de ocorrência de Salmonella nas carcaças de frangos resfriadas e a média de NMP de Salmonella por mL, na leitura pelo ágar XLT4 foi de 2,7 células e no ágar BGN foi de 1,3 células. Os sorovares de Salmonella isolados das carcaças de frangos no estudo foram S. Enteritidis, S. Agona, S.Rissen, S. Heidelberg e S. Livingstone. A análise dos resultados demonstrou existir um número variável de células de Salmonella contaminando as carcaças de frango resfriadas que estão à venda ao consumidor.

Salmonella in poultry remains an important worldwide problem, and among foodborne pathogens, the Salmonella appears as one of the most important outbreaks agents. To assess the risks of acquiring infection via undercooked poultry or cross contamination from chickens, it is important to determine the extent of the contamination on raw poultry with this pathogen. In this study, 180 refrigerated broiler carcasses, obtained from local stores, were assessed to recover Salmonella by the most probable number (MPN) method to quantify bacterias cells onto brilliant green agar with novobiocin (BGN) and xylose lysin tergitol 4 agar (XLT4). The results showed 12,2 percent occurrence of Salmonella by conventional microbiological method from refrigerated broiler carcasses. The MPN per ml rates was 2,7 cells on XLT4 agar and 1,3 cells on BGN agar plate. The Salmonella serovars isolated from broiler carcasses were S. Enteritidis, S. Agona, S. Rissen, S. Heidelberg and S. Livingstone. Results analysis showed that could be a variable number of cells contaminating refrigerated broiler carcasses, which have been selling to the consumer.

Campylobacter em humanos e sua relação com animais de produção / Campylobacter in humans and its relationship with farm animals

Bactérias do gênero Campylobacter são patógenos entérios de origem alimentar, sendo o Campylobacter jejuni freqüentemente relatado nas ocorrências de gastroenterite em seres humanos. A associação entre Campylobacter em aves e enterites no homem decorre da persistência do agente no habitat do frango de corte, que proporciona a colonização intestinal assintomática na ave, sendo esta a origem mais importante de contaminação das carcaças.O produto brasileiro é altamente competitivo no mercado mundial, razão pela qual o Campylobacter pode ser o próximo alvo para a imposição de barreiras sanitárias que, por sua vez, dificultarão as exportações do frango brasileiro para diversos mercados. Considerando a necessidade de controlar e minimizar Campylobacter em produtos de origem animal, este trabalho teve por objetivos apresentar dados sobre campilobacterioses em humanos e sua relação com animais de produção, tomando-se como premissa que, se estes tiverem menor nível de colonização por Campylobacter durante a criação, provavelmente o nível de contaminação das carcaças será diminuído, reduzindo as infecções em humanos por Campylobacter.

Salinomicina e semduramicina associadas em diferentes concentrações no controle da eimeriose em frangos de corte / Salinomycin and semduramicin in different concentrations on the broilers eimeriosis control

O presente estudo teve por objetivo investigar a associação de salinomicina e semduramicina, em diferentes doses, frente à infecção mista controlada de Eimeria acervulina, E. maxima e E. tenella em frangos de corte. Oitocentas aves foram divididas em 5 grupos (T1: ração não medicada; T2: 30 ppm de salinomicina e 12,5 ppm de semduramicina; T3: 30 ppm de salinomicina e 15 ppm de semduramicina; T4: 40 ppm de salinomicina e 12,5 ppm de semduramicina e T5: 40 ppm de salinomicina e 15 ppm de semduramicina) e inoculadas aos 15 dias de idade com oocistos esporulados de E. acervulina, E. maxima e E. tenella, em inóculo misto, via ração. Parâmetros produtivos e escore de lesões foram registrados. Todos os grupos tratados apresentaram estatisticamente melhores ganhos de peso cumulativo aos 21 dias de vida. Aos 35 dias de vida, somente o grupo T3 apresentou diferença significativa. A conversão alimentar cumulativa apresentou diferença estatística nos grupos T4 e T5. O tratamento T5 foi mais eficaz no controle de E. tenella. T3 e T5 obtiveram diferenças estatísticas no escore médio de lesão das três espécies. O uso de salinomicina, associada a semduramicina, em baixas doses demonstrou uma opção viável no controle da coccidiose neste experimento.

This study aimed to investigate the association of salinomycin and semduramicin, in different doses, against controlled mixed infection of Eimeria acervulina, E. maxima and E. tenella in broiler chickens. Eight hundred birds were divided into 5 groups (T1: not medicated feed; T2: 30 ppm of salinomycin and 12.5 ppm of semduramicin; T3: 30 ppm of salinomycin and 15 ppm of semduramicin; T4: 40 ppm of salinomycin and 12,5 ppm of semduramicin and T5: 40 ppm of salinomycin and 15 ppm of semduramicin) and inoculated at 15 days of age with sporulated oocysts of E. acervulina, E. maxima and E. tenella in a mixed suspension, through the feed. Performance data and lesion scores were recorded. All treated groups showed statistically better cumulative weight gain at 21 days old. At 35 days old only the T3 group showed significant difference. Cumulative feed conversion showed statistical difference in the groups T4 and T5. The treatment T5 was more effective in the coccidiosis control of E. tenella. T3 and T5 achieved statistical differences in the average lesion scores of the three analyzed species. The association of salinomycin and semduramicin used in lower doses than the usual, showed to be an option in the coccidiosis control in this experiment.